Genetica.pl

Namnożenie materiału genetycznego

Oczyszczony DNA musi zostać namnożonony w reakcji zwanej reakcją PCR (łańcuchową reakcją polimerazy, polymerase chain reaction). Reakcja ta umożliwia wielokrotne powielenie cząsteczek DNA dzięki czemu nawet minimalna ilość materiału genetycznego uzyskanego z izolacji wystarczy do dalszych analiz.

Do próbek z wyizolowanym DNA dodany zostaje enzym polimeraza DNA, który katalizuje reakcję syntezy nowych cząsteczek DNA. Próbki zostają następnie umieszczone w termocyklerze, który cyklicznie podgrzewa i ochładza mieszaninę reakcyjną. Każdy taki cykl podwaja ilość DNA w próbce. Podniesienie temperatury powoduje rozplecenie się dwuniciowego DNA, polimeraza przyłacza się do każdej z rozplecionych nici i rozpoczyna syntezę nowej, wykorzystując starą jako wzorzec. Taki mechanizm zapewnia, że pod koniec reakcji pcr otrzymamy ogromną ilość nowych cząsteczek DNA z ktorych każda będzie wierną kopią pierwowzoru.

Dodatkowo do próbek dodaje się tzw. startery, są to krótkie, specjalnie oznakowane fragmenty DNA, komplementarne tylko do wybranych, konkretnych miejsc w ludzkim genomie. Ich użycie zapewnia, ze powieleniu ulegną tylko interesujące nas fragmenty DNA, wykorzystywane do badania pokrewieństwa, a nie cały genom.

Uzyskana w ten sposób fragmenty DNA poddawane są następnie rozdziałowi elektroforetycznemu.